Правила работы с криопробирками (замораживание и размораживание клеток)


При работе с пробирками CryoPure всегда соблюдайте следующие правила безопасности:

  • Храните пробирки только в газовой фазе.
  • Заполняйте пробирки до нанесенной отметки.
  • Плотно закрывайте крышку пробирки. Не закручивайте пробирку с усилием, не используйте для закручивания пробирки какие-либо подручные средства.
  • Используйте защитную одежду, экран для защиты лица, очки и перчатки.
  • Помещайте пробирки в контейнер с крышкой.

Cтандартный протокол по замораживанию клеток млекопитающих:

  • Отмойте клетки с PBS.
  • Поместите клетки в тот раствор, который прописан в выбранной методике (например, в раствор с ЭДТА, трипсином или раствор ЭДТА-трипсин).
  • Остановите реакцию клеточной средой, содержащей сыворотку.
  • Произведите подсчет клеток, используя тип камеры, указанный в методике.
  • Отцентрифугируйте клетки (5 минут, 350 х g, комнатная температура), удалите супернатант.
  • Ресуспендируйте клеточный осадок в культуральной среде, содержащей сыворотку. Содержание клеток в полученном образце должно быть около 107 / мл.
  • Добавьте 1 объем среды для замораживания (например, следующего состава: 50% среды, 30% FCS, 20% DMSO). Конечное содержание клеток в образце должно быть 5 х 106 / мл.
  • Наполните пробирки CryoPure до нанесенной отметки.
  • Заморозьте образцы в специальном контейнере до температуры - 80OºС. Соблюдайте правила заморажива- ния: 1OС/ мин. Клетки могут храниться при температуре -80ºС в течение 6 часов. В зависимости от типа клеток образцы могут сохранять жизнеспособность в течение нескольких дней при температуре -80ºС.
  • После этого поместите пробирки в криоконтейнер с жидким азотом.

Стандартный протокол по размораживанию клеток:

  • Быстро достаньте пробирки CryoPure из криоконтейнера с жидким азотом и поместите их водяную баню с крышкой (37ºС).
  • После полного размораживания проб обработайте пробирки 70% спиртом. Высушите пробирки. Перенесите клеточную суспензию из пробирки CryoPure в пробирку объемом 15 мл (например, с кат.номером 62.554.002).
  • Добавьте культуральную среду и отцентрифугируйте пробирку (5 минут, 350 х g, комнатная температура).
  • Удалите супернатант и ресуспендируйте клетки в подходящей по методике культуральной среде.
  • Поместите клетки в культуральный флакон.

Tags: криопробирки

НАША ГРУППА КОМПАНИЙ 
BioTestLabVetfactorVeteco

callback (заказать обратный звонок)

Ваше имя 
Телефон 
Пожалуйста, введите код: qoot Защита от спама