Правила роботи з кріопробірками (заморожування і розморожування клітин)

При роботі з пробірками CryoPure завжди дотримуйтесь наступних правил безпеки:

• Зберігайте кріопробірки тільки в газовій фазі.
• Заповнюйте пробірки до нанесеної позначки.
• Щільно закривайте кришку пробірки. Не закручуйте пробірку з зусиллям, не використовуйте для закручування пробірки будь-які підручні засоби.
• Використовуйте захисний одяг, екран для захисту особи, окуляри і рукавички.
• Поміщайте кріопробірки в контейнер з кришкою.

Стандартний протокол щодо заморожування клітин ссавців:

• Відмийте клітини з PBS.
• Помістіть клітини в той розчин, який прописаний в обраній методиці (наприклад, в розчин з ЕДТА, трипсином або розчин ЕДТА-трипсин).
• Зупиніть реакцію клітинної середовищем, що містить сироватку.
• Проведіть підрахунок клітин, використовуючи тип камери, зазначений в методиці.
• Отцентріфугіруйте клітини (5 хвилин, 350 х g, кімнатна температура), видаліть супернатант.
• Ресуспендіруют клітинний осад в культуральному середовищі, що містить сироватку. Зміст клітин в отриманому зразку має бути близько 107 / мл.
• Додайте 1 обсяг середовища для заморожування (наприклад, наступного складу: 50% середовища, 30% FCS, 20% DMSO). Кінцевий вміст клітин в зразку має бути 5 х 106 / мл.
• Наповніть пробірки CryoPure до нанесеної позначки.
• Заморозьте зразки в спеціальному контейнері до температури – 80ºС. Дотримуйтесь правил заморажіва- ня: 1OС / хв. Клітини можуть зберігатися при температурі – 80ºС протягом 6 годин. Залежно від типу клітин зразки можуть зберігати життєздатність протягом декількох днів при температурі – 80ºС.
• Після цього помістіть пробірки в кріоконтейнер з рідким азотом.

Стандартний протокол щодо розморожування клітин:

• Швидко дістаньте пробірки CryoPure з кріоконтейнера з рідким азотом і помістіть їх водяну баню з кришкою (37ºС).
• Після повного розморожування проб обробіть пробірки 70% спиртом. Висушіть пробірки. Перенесіть клітинну суспензію з пробірки CryoPure в пробірку об’ємом 15 мл (наприклад, з кат.номером 62.554.002).
• Додайте культуральне середовище і отцентріфугіруйте пробірку (5 хвилин, 350 х g, кімнатна температура).
• Видаліть супернатант і ресуспендіруют клітини у відповідній за методикою культуральному середовищі.
• Помістіть клітини в культуральний флакон.

Теги: криопробирки