Правила работы с криопробирками (замораживание и размораживание клеток)

При работе с пробирками CryoPure всегда соблюдайте следующие правила безопасности:

• Храните пробирки только в газовой фазе.
• Заполняйте пробирки до нанесенной отметки.
• Плотно закрывайте крышку пробирки. Не закручивайте пробирку с усилием, не используйте для закручивания пробирки какие-либо подручные средства.
• Используйте защитную одежду, экран для защиты лица, очки и перчатки.
• Помещайте пробирки в контейнер с крышкой.

Cтандартный протокол по замораживанию клеток млекопитающих:

• Отмойте клетки с PBS.
• Поместите клетки в тот раствор, который прописан в выбранной методике (например, в раствор с ЭДТА, трипсином или раствор ЭДТА-трипсин).
• Остановите реакцию клеточной средой, содержащей сыворотку.
• Произведите подсчет клеток, используя тип камеры, указанный в методике.
• Отцентрифугируйте клетки (5 минут, 350 х g, комнатная температура), удалите супернатант.
• Ресуспендируйте клеточный осадок в культуральной среде, содержащей сыворотку. Содержание клеток в полученном образце должно быть около 107 / мл.
• Добавьте 1 объем среды для замораживания (например, следующего состава: 50% среды, 30% FCS, 20% DMSO). Конечное содержание клеток в образце должно быть 5 х 106 / мл.
• Наполните пробирки CryoPure до нанесенной отметки.
• Заморозьте образцы в специальном контейнере до температуры - 80OºС. Соблюдайте правила заморажива- ния: 1OС/ мин. Клетки могут храниться при температуре -80ºС в течение 6 часов. В зависимости от типа клеток образцы могут сохранять жизнеспособность в течение нескольких дней при температуре -80ºС.
• После этого поместите пробирки в криоконтейнер с жидким азотом.

Стандартный протокол по размораживанию клеток:

• Быстро достаньте пробирки CryoPure из криоконтейнера с жидким азотом и поместите их водяную баню с крышкой (37ºС).
• После полного размораживания проб обработайте пробирки 70% спиртом. Высушите пробирки. Перенесите клеточную суспензию из пробирки CryoPure в пробирку объемом 15 мл (например, с кат.номером 62.554.002).
• Добавьте культуральную среду и отцентрифугируйте пробирку (5 минут, 350 х g, комнатная температура).
• Удалите супернатант и ресуспендируйте клетки в подходящей по методике культуральной среде.
• Поместите клетки в культуральный флакон.

Метки: криопробирки